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磁性微球表面生物分子嫁接方案

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  磁性微球的使用必须依靠多功能磁分离架。磁分离架带有10个10mm直径(1mL和2mL vials)及2个16mm直径(10-15mL vials)的孔供选择使用。
 
  为延长磁性微球使用寿命,在其溶液中添加了0.01%(NaN3)作为抑菌剂(避免皮肤直接接触)。
 
  使用前先用去离子水或适当缓冲液震荡或超声清洗,放入磁力架一般2-5分钟后,磁性微球就可以被吸到靠近磁铁的一面,然后用带细尖口枪头小心地吸取清液,不要吸走磁球(可保留一些液体,多洗几次)。加反应液后需震荡一定的时间,反应后按照上述方法清洗。
 
  磁性微球(Magpearl COOH)表面生物分子嫁接方案:
 
  I)用EDC和NHS活化
 
  1. 摇匀磁球后,从小瓶中移取一定体积(比如500μL)含有羧酸基团的磁珠,用等体积的去离子水和浓度为50 mM、pH值为6的MES各洗两次;
 
  2. 把EDC溶解在冷却的50 mM、pH值为6的MES溶液中配制成100 mg/mL的溶液;
 
  3. 同样地,于冷却的50 mM、pH值为6的MES溶液中配制100 mg/mL的NHS溶液;
 
  4. 加200μL EDC溶液和200μL NHS溶液到洗过的磁珠溶液中,充分混合,并在室温条件下震荡30min;
 
  5. 震荡结束后,磁分离3-4min并除去清液,用500μL 浓度为50 mM、pH值为6的MES洗两次,洗完后的磁珠已经被活化,分散在缓冲液中,可以用于含氨基基团的配体的键合。
 
  Ⅱ)活化后配体的固定
 
  1. 加入适量(0.01-0.5mg)配体到大约200μL浓度为50 mM、pH值为6的MES缓冲液中,然后把此溶液加到活化的磁珠溶液中;
 
  2. 如需要再补加一定量浓度为50 mM、pH值为6的MES到上述溶液中,使终体积为500μL,确保混合均匀;
 
  3. 在室温条件下至少震荡1h或在4℃ 条件下震荡3h;
 
  4. 震荡结束后,磁分离3-4min并除去清液;
 
  5. 按下述步骤封闭和清洗键合的磁珠。
 
  Ⅲ)屏蔽未反应的表面
 
  为了除去未起作用的活化羧酸基团,含有配体且键合过的磁珠在室温条件下,要么用浓度为50mM,pH值为7.4的Tris震荡15min,要么用浓度为50mM的乙醇胺的磷酸盐缓冲液(pH 8.5)震荡 60min;
 
  1. 涂覆过的磁珠需要用500μL 的PBS溶液或者50mM的Tris 洗三次,溶液中可以加入0.1 - 0.5 %的BSA或者脱脂奶粉做封闭液封闭一些活性位点。
 
  2. 涂覆过的磁珠重新悬浮于所需浓度的 PBS缓冲液或Tris储存液中,在2 - 8℃条件下储存备用。 涂覆的磁珠在2 - 8℃时如果固定配体非常稳定,通常可以储存几个月,还可以加入0.02%(w/v)(NaN3)作为抑菌剂。

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